在實驗中，科研人員首先需要將小鼠血清樣本按照說明書要求進行預(yù)處理，然后加入到預(yù)先包被有特異性抗體的微孔板中。經(jīng)過一系列溫育、洗滌、加酶標(biāo)抗體、再溫育、顯色及終止反應(yīng)等步驟后，通過酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準曲線，即可計算出小鼠血清中總補體的活性單位。

方法與結(jié)果

1 色譜條件選擇

 色譜柱：HYPERSIL ODS(10肛m，200 mm× 4．6 mm，)，流動相：乙腈一甲醇一水一磷酸 (體積比為18．40：27．50：54．10：0．05)，流速： 0．8 mL·min～，檢測波長：207 nm，柱溫：20℃ ， 進樣量：20 L。

2 標(biāo)準溶液及內(nèi)標(biāo)溶液的配制

 精密稱取人參皂苷Re適量，用無水甲醇溶 解配制成1 mg·I -1的標(biāo)準儲備液，稀釋標(biāo)準儲備 液得100 mg·L 標(biāo)準工作液。內(nèi)標(biāo)物*用無水甲醇溶解配成100 mg·L-1內(nèi)標(biāo)儲備液，稀釋 內(nèi)標(biāo)儲備液得20 mg·L-1的內(nèi)標(biāo)工作液，置冰箱 中冷凍保存。

 3 給藥方法

 對大鼠實施頸靜脈持久性插管術(shù)[ 】，術(shù)后大 鼠單籠飼養(yǎng)，72 h后供實驗使用，在每次取血的 間隔內(nèi)將導(dǎo)管內(nèi)充滿100 mg·L-1肝素生理鹽水 以防血凝。大鼠實驗前禁食12 h交叉靜注20、 30、40 mg·kg-1不同劑量的人參皂苷Re注射液， 交叉實驗的實驗間隔為72 h。于給藥前和給藥后 5、10、20、30、45、60、90、120 min各取血250 L置 于涂有肝素的塑料離心管中，離心(3 000 r·min-1) 5 rain，取血漿100肚L，置于冰柜(一18℃)中保存待測。

4 血漿樣品的處理

 精密吸取血漿樣品100 L置5．0 mL具塞 離心試管中，加入2 mI 正丁醇和20 L內(nèi)標(biāo)工 作液，置液體快速混合器上振蕩5 min。離心 (5 000 r·min-1)10 min，移取上清液，氮氣吹干， 用流動相溶解。離心(10 000 r·min-1)10 min，取 上清液進樣20肚L。

5 專屬性考察

 按“2．4”條方法操作。實驗條件下，血漿中雜 質(zhì)不干擾樣品及內(nèi)標(biāo)物的測定，人參皂苷Re及 內(nèi)標(biāo)物*的保留時間分別為15 min和 17 min，。

值得注意的是，為了保證實驗結(jié)果的準確性和可靠性，整個操作過程需要嚴格遵守試劑盒的使用說明，并控制好實驗條件，如溫度、時間等。此外，對于不同批次的小鼠血清樣本，還需要進行平行對照實驗，以消除實驗誤差對結(jié)果的影響。

小鼠血清總補體(CH50)Elisa測定試劑盒的應(yīng)用范圍廣泛，不僅可用于小鼠免疫學(xué)研究，還可用于疾病診斷、預(yù)后判斷以及疫苗效果評估等領(lǐng)域。隨著生物醫(yī)學(xué)研究的不斷深入和發(fā)展，該試劑盒將在未來發(fā)揮更加重要的作用，為科研人員提供更加準確、快速和便捷的實驗手段，推動生物醫(yī)學(xué)研究的進步和發(fā)展。