豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV；或稱 Hog cholera virus，

HCV）是 ssRNA 病毒，屬黃病毒科瘟病毒屬，其 RNA 為單股正鏈。由 CSFV

引起的豬瘟病是一種急性、熱性、高度接觸性的傳染病，廣泛存在于全世界各養(yǎng)

豬國(guó)家，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。因此，CSFV 的快速準(zhǔn)確鑒定，對(duì)該病的預(yù)防

和檢疫有著重要作用。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，采用 RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)疑似

感染動(dòng)物血清或組織中的 CSFV。它具有下列特點(diǎn)：

1. 用于 CSFV 的定性鑒定檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查。

2. 能對(duì)樣品中 CSFV 進(jìn)行快速檢測(cè)，具有良好的特異性和敏感性。

3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

 一、樣品 RNA 的制備

用自選方法純化 CSFV 樣品的 RNA，也可以另購(gòu)本公司的一管式病毒

RANout 或柱式病毒 RNAout，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。

二、陽(yáng)性對(duì)照

1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)

照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 使用本陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。

最好在專門的區(qū)域操作。

三、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）

3. 在 PCR 管中加入下列成分：

成 份 樣品 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照

雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL

CSFV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL

樣品 RNA 1-5 uL 無(wú) 無(wú)

CSFV 陽(yáng)性對(duì)照 無(wú) 2 uL 無(wú)

補(bǔ)超純水到 28 uL 28 uL 28 uL

MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL

4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。

過(guò)程 溫度 時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄 60℃ 30 分鐘

預(yù)變性 94℃ 2 分鐘

PCR 反應(yīng)

（30 個(gè)循環(huán)）

94℃ 30 s

55℃ 30 s

72℃ 1 分鐘

延伸 72℃ 5 分鐘

5. 電泳檢測(cè) RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 267 bp。