豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis，TGE）是由冠狀病毒
科的傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起
的豬的一種高度接觸性傳染病，其臨床癥狀以嘔吐、嚴(yán)重腹瀉和脫水性腸炎為主
要特征。不同年齡和品種的豬均易感，尤其對(duì) 2 周齡以內(nèi)的仔豬致死率高達(dá)
100％，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。TGEV 為不分節(jié)段的單股正鏈 RNA 病毒，
具有 4 種結(jié)構(gòu)蛋白，其中編碼病毒核衣殼（N）蛋白的 N 基因高度保守，故 N
基因可被作為 RT-PCR 診斷的最佳基因。本試驗(yàn)根據(jù) N 基因序列設(shè)計(jì)特異性檢
測(cè)引物，建立了檢測(cè) TGEV 的 RT-PCR 方法。它具有下列特點(diǎn)：
1. 用于 TGEV 的定性鑒定檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查。
2. 能對(duì)樣品中 TGEV 進(jìn)行快速檢測(cè)，具有良好的特異性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 TGEV 樣品的 RNA，也可以另購(gòu)本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、陽(yáng)性對(duì)照
1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)
照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 使用本陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。
最好在專門(mén)的區(qū)域操作。
三、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 樣品 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照
雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
TGEV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無(wú) 無(wú)
TGEV 陽(yáng)性對(duì)照 無(wú) 2 uL 無(wú)
補(bǔ)超純水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。
過(guò)程 溫度 時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄 60℃ 30 分鐘
預(yù)變性 95℃ 3 分鐘
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
94℃ 30 s
55℃ 40 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 7 分鐘
5. 電泳檢測(cè) RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 224 bp