非洲豬瘟(Af rican swine fever , ASF) 是由非洲豬瘟病毒(Af rican swine fever
virus , ASFV) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率高達(dá) 100 %,是
我國(guó)一類(lèi)動(dòng)物疫病和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，受到世界各國(guó)的高
度重視。因此 ASFV 的快速準(zhǔn)確鑒定，對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。目前，對(duì)于
中國(guó)這種非 ASF 疫區(qū)，ASF 的檢測(cè)主要以丌涉及活病毒傳代操作的 PCR 為主，為此本
公司開(kāi)發(fā)了 ASFV 的 PCR 檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性比使用世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的引物高 100 倍以上。
3. 特異性高，引物是根據(jù)保守的 vp73 基因設(shè)計(jì)，OIE（世界動(dòng)物衛(wèi)生組織）推薦。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 DNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 DNAout 戒柱
式病毒 DNAout 產(chǎn)品。
二、PCR（60 uL 體系）
1、樣品管：在 PCR 管中加入下列成分：
成分 加入量
PCR MagicMix 2.0 30 uL
待檢測(cè)樣品 DNA(自備) X
ASFV 專(zhuān)一性引物一 2 uL
ASFV 專(zhuān)一性引物二 2 uL
補(bǔ)水到 60 uL
三、PCR 反應(yīng)參數(shù)：
過(guò)程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
94℃ 1 min
50℃ 1 min
72℃ 1 min
最后延伸 72℃ 10 min
四、電泳檢測(cè)
1、取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 戒瓊脂糖凝膠上電泳，最好使用 100 bp DNA
Marker，產(chǎn)物的大小為 278 bp。