牛病毒性 腹瀉 -- 粘膜?。?Bovine viral diarrheamucosal disease ，
BVD-MD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viml diarrheamucosal disease
virus，BVDV）引起的以粘膜収炎、糜爛、壞死和腹瀉等特征為主的疾病。該病
在世界各地廣泛流行和傳播，一些畜牧業(yè)収達(dá)的國(guó)家尤其嚴(yán)重。因此，BVDV 的
快速準(zhǔn)確鑒定，對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。為此本公司開収了本產(chǎn)品，
采用 RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)疑似感染動(dòng)物血清或組織中的 BVDV。它具有下列特點(diǎn)：
1. 用于 BVDV 的定性鑒定檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查。
2. 能對(duì)樣品中 BVDV 進(jìn)行快速檢測(cè)，具有良好的特異性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 BVDV 樣品的 RNA，也可以另購(gòu)本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、陽(yáng)性對(duì)照
1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品丌提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)
照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 使用本陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意丌要污染其他試劑和成分。
最好在專門的區(qū)域操作。
三、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 樣品 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照
雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
BVDV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無(wú) 無(wú)
BVDV 陽(yáng)性對(duì)照 無(wú) 2 uL 無(wú)
補(bǔ)超純水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。
過程 溫度 時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄 42℃ 30 min
預(yù)變性 95℃ 3 min
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
95℃ 30 s
58℃ 15 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 10 min
5. 電泳檢測(cè) RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 244 bp